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農業論文

凡納濱對蝦養殖體系中群體感應淬滅菌的篩選

時間:2020年10月10日 所屬分類:農業論文 點擊次數:

摘要 從凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamai)養殖體系中篩選得到具有群體感應淬滅(Quorum quenching, QQ)活性的潛在功能菌,并對菌株進行16S rDNA鑒定、安全性評估及發酵條件優化。 采用根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens) A136液體X-gal法進行活性菌株篩選

  摘要 從凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamai)養殖體系中篩選得到具有群體感應淬滅(Quorum quenching, QQ)活性的潛在功能菌,并對菌株進行16S rDNA鑒定、安全性評估及發酵條件優化‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍。 采用根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens) A136液體X-gal法進行活性菌株篩選,發現2株細菌(BDZ5和W1B)的發酵液對信號分子己;呓z氨酸內酯(C6-HSL)具有顯著的降解作用,但經沸水浴處理后均喪失降解活性‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍。 經16S rDNA基因序列分析,菌株BDZ5和W1B分別被鑒定為芽孢桿菌屬(Bacillus)和科貝特氏菌屬(Cobetia)‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍。 安全性評估結果顯示,菌株BDZ5和W1B均無溶血性,且對多數抗生素具有敏感性,注射2株活性菌未提高凡納濱對蝦死亡率,且對凡納濱對蝦血清免疫酶活性無顯著影響。 單因素條件優化結果顯示,在起始pH為7.0、鹽度為20、0.0005%的MnCl2條件下培養48 h后,菌株BDZ5達到最大生長量; 在起始pH為6.0、鹽度為40、0.05%的CaCl2條件下培養48 h,菌株W1B達到最大生長量。 2株菌的最適信號分子C6-HSL降解條件與其生長條件有所不同,在起始pH為7.5、鹽度為30、0.0005%的MnCl2條件下培養48 h,2株活性菌對信號分子C6-HSL的降解率達到最大值。 研究表明,菌株BDZ5和W1B可作為益生菌應用于水產養殖,為基于QQ角度防治對蝦細菌性病害提供優良菌種。

  關鍵詞 凡納濱對蝦; 細菌性病害防治; 群體感應淬滅菌株; 安全性; 條件優化

漁業養殖

  隨著凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamai)養殖業的不斷發展,急性肝胰腺壞死綜合征(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND) (Soto- Rodriguez et al, 2015)、發光病(Luminous Bacterial Disease) (Lavilla-Pitogo et al, 1990)、紅體病(Red Body Disease) (Cao et al, 2014)等細菌性病害頻發,給對蝦養殖業造成了嚴重的經濟損失,阻礙了其進一步健康發展。 使用抗菌藥物是控制細菌性病害的主要方法,但會造成病原菌耐藥性的產生,并對生態環境及人類健康有危害(Elmahdi et al, 2016)。 因此,亟待探索新的環境友好型的對蝦細菌性病害防治手段。

  群體感應(Quorum sensing, QS)是廣泛存在于細菌之間的一種特殊的通訊手段,細菌可以通過向環境中釋放特定的信號分子,如不同碳鏈長度的N-;呓z氨酸內酯(N-acylhomoscrine lactones, AHLs)、自誘導肽(Autoinducing peptides, AIPs)和自誘導物-2 (Autoinducter-2, AI-2)等,并通過感知信號分子濃度的變化調控特定基因的表達(Whiteley et al, 2017)。

  對蝦養殖過程中常見的病原菌包括哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)、坎貝氏弧菌(V. campbellii)、副溶血弧菌 (V. parahaemolyticus)等(Austin et al, 2006; Haldar et al, 2011; Joshi et al, 2014)。 Ng等(2009)研究表明,多數病原菌的毒力因子表達及致病性的產生與其QS系統具有密切聯系。 抑制病原菌的QS系統,即群體感應淬滅(Quorum quenching, QQ) (Grandclément et al, 2015)可以在不殺死病原菌的前提下減輕其致病性 (王巖等,2017)。

  Tinh等(2007)曾從凡納濱對蝦體內篩選得到3株QQ菌,并發現該3株菌能對哈維氏弧菌產生的信號分子起到降解作用,進而調控其代謝活動。 Vinoj等(2014)研究發現,具有QQ功能的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)能有效減少由副溶血弧菌引起的印度明對蝦(Fenneropenaeus indicus)死亡率。 這些研究均表明,基于QQ角度防治水產動物細菌性病害問題的可行性及巨大潛力。

  本研究以根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens) A136株為報告菌,在實驗室已篩選得到的菌株基礎上,進一步采用Tang等(2013)所構建的A136液體X-gal法,從凡納濱對蝦體內及養殖環境中篩選到具有QQ功能的活性菌株,探討了活性菌株的安全性,并通過單因素實驗探究了不同培養條件對活性菌株生長及其對己;呓z氨酸內酯(C6-HSL)降解率的影響,為基于QQ角度防治對蝦細菌性病害提供優良菌種和基礎研究資料。

  1 材料與方法

  1.1 群體感應猝滅菌株的篩選

  從健康凡納濱對蝦體內及養殖環境中分離出純菌株后,以根癌農桿菌A136株為報告菌,參照并改進Tang等(2013)所構建的A136液體X-gal法進行QQ菌的篩選。 A136于培養基(蛋白胨10 g、酵母粉5 g、NaCl 10 g、H2O 1000 ml、pH 7.0; 滅菌后加入終濃度為50 μg/ml的壯觀霉素和終濃度為4.5 μg/ml的四環素)中活化24 h后,調節OD600=0.5,并按1%接種量接種于新的A136培養基中,加入終濃度為250 μg/ml的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)共同培養24 h。

  待測菌株在LB液體培養基(蛋白胨10 g、酵母粉5 g、NaCl 30 g、H2O 1000 ml、pH 7.2~7.4)中活化24 h后稀釋至OD600 nm=0.5,然后,按2%接種量接種于新的LB液體培養基中培養24 h。 取178 μl培養好的待測菌發酵液與2 μl 5 mmol/L的信號分子C6-HSL (Cayman Chemical公司, 美國)及20 μl哌嗪-1,4-二乙磺酸(PIPEs)緩沖液(1 mol/L, pH 6.7)混合,制成孵育體系,并于30℃條件下孵育。

  陽性對照(Positive control, PC)組的孵育體系中,以178 μl無菌LB液體培養基代替待測菌發酵液,陰性對照(Negative control, NC)組中無信號分子C6-HSL。 孵育24 h后,離心(9570×g, 10 min)取上清液10 μl,與190 μl培養好的A136菌液混合加入96孔板中培養12 h。 測定混合體系的OD630 nm和OD490 nm,根據公式:

  計算β-gal活性,活性越高表明混合體系中信號分子C6-HSL的含量越高,即待測菌株的QQ活性越弱。 同時,通過檢測活性菌株AHL降解活性的耐熱性,初步判斷活性菌株是否存在AHL降解酶。 將篩選出的活性菌株在LB液體培養基中培養24 h后,沸水浴處理5 min,再采用A136液體X-gal法檢測其C6-HSL降解活性是否喪失。

  1.2 菌株16S rDNA鑒定

  測定活性菌株的基因16S rDNA序列,并于NCBI進行基因序列同源性比較分析,利用MEGA 5.0軟件鄰接法(Neighbor-joining method)構建系統發育樹。 目標菌株的16S rDNA序列由生工生物工程(上海)股份有限公司提取并測定。

  1.3 活性菌株的體外安全性評估

  1.3.1 溶血性

  采用濾紙片法(王曉琳等, 2016)檢測活性菌株的溶血性,血瓊脂平板培養基購自貝瑞特生物技術(鄭州)有限責任公司。 將無菌濾紙片置于血瓊脂培養基上方,將培養好的活性菌株發酵液稀釋至OD600 nm=1.0后,取10 μl加在濾紙片上,每個功能菌重復3次,30℃條件下培養24 h,觀察血瓊脂培養基上是否有溶血圈產生。

  1.3.2 藥敏性

  采用抗菌藥物藥敏紙片瓊脂擴散法(K-B法)(王嵐等, 2017)進行活性菌株藥敏性實驗,藥敏紙片購自杭州微生物試劑有限公司。 將活性菌株接入LB液體培養基中培養24 h后,取100 μl OD600 nm=1.0的發酵液均勻涂布于LB固體培養基上,并將藥敏紙片貼于上方,每種藥敏紙片重復3次。 在30℃條件下,培養24 h后,觀察是否出現抑菌圈并用游標卡尺測量抑菌圈直徑。 參照CLSI標準–2011的標準判斷菌株對各抗生素的敏感性。

  1.4 活性菌株的體內安全性評估

  1.4.1 實驗對蝦與菌株

  實驗凡納濱對蝦購自山東乳山某對蝦養殖場,平均體長為(5.7±0.4) cm,平均體重為(1.9±0.9) g,體色正常,游泳活潑,暫養7 d后進行實驗。

  從上述實驗中篩選得到的菌株BDZ5和W1B作為實驗材料,以實驗室前期保存的副溶血弧菌為PC組。 將各菌株于LB液體培養基中培養24 h,然后離心(1531×g, 10 min),棄上清液,并用無菌生理鹽水稀釋至濃度為1×106和1×104 CFU/ml的菌懸液。

  1.4.2 實驗設計

  采用肌肉注射的方法進行體內安全性評估,注射部位為凡納濱對蝦第Ⅳ、Ⅴ腹節之間,注射劑量為50 μl/尾。 實驗共分為7組,陰性對照組(NC組)注射等劑量的無菌生理鹽水; L-BDZ5、L-W1B和L-PC組為低濃度(Low, L-)菌液組,分別注射濃度為1×104 CFU/ml的BDZ5、W1B和副溶血弧菌菌懸液; H-BDZ5、H-W1B和H-PC組為高濃度(High, H-)菌液組,即分別注射濃度為1×106 CFU/ml的相應菌懸液。 每組設置3個重復,每個重復放15只蝦。 實驗持續96 h,實驗期間,不投喂,不換水,連續充氧。

  1.4.3 樣本采集與指標測定

  實驗期間,定期觀察、記錄凡納濱對蝦的死亡情況并計算累積死亡率。 在實驗的第96小時采集各實驗組對蝦的血清,用于免疫指標的測定。免疫指標包括超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)、溶菌酶(LZM)活力和抗菌酶活力(Ua)。 其中,SOD、NOS和LZM活力采用南京建成生物科技有限公司試劑盒測定;Ua的測定參照Xu等(2013)的方法,將哈維氏弧菌用磷酸鉀鹽緩沖溶液(1 mol/L, pH=6.4)稀釋成OD570 nm=0.4的菌懸液,在試管(冰水浴條件下)中加入3 ml哈維氏弧菌菌懸液和50 μl血清,混勻后立即測定其OD570 nm值A1,再將試管于37℃條件下水浴30 min,立即取出并測定其OD570 nm值A2,根據公式:Ua=[(A1–A2)/A2]1/2計算Ua。

  1.5 活性菌株發酵條件優化

  以LB液體培養基為基礎培養基,采用分光光度計法探究不同發酵條件對菌株生長的影響,采用1.1中的A136液體X-gal法探究不同發酵條件對菌株降解信號分子C6-HSL能力的影響。

  培養時間:保持其他條件一致,設置12、24、36、48和60 h共5個發酵時間,在28℃、180 r/min條件下,培養以探究功能菌的最適培養時間。

  起始pH:設置5.0、6.0、7.0、7.5和8.0共5個起始pH,其他條件一致,在28℃、180 r/min條件下培養48 h,以確定最適起始pH。

  鹽度:向培養基中添加NaCl,設置0、10、20、30和40共5個鹽度,在其他發酵條件及發酵時間一致的情況下,探究最適發酵鹽度‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍。

  金屬離子:參照葉云峰等(2011)的方法,根據菌株對K+、Mg2+、Ca2+、Fe2+和Mn2+利用情況的差 異,按0.5%的量加入K2HPO43H2O,按0.05%的量加入MgSO47H2O和CaCl2,按0.0005%的量加入FeSO47H2O和MnCl2,保持其他發酵條件及發酵時間一致,確定最適發酵金屬離子。

  1.6 數據統計與分析

  實驗數據均采用平均值±標準差(Mean±SD),運用SPSS 22.0軟件進行數據統計與分析。 分析之前 測試數據的正態性(Shapiro-wilk test)和方差齊性(Levene's test),若數據不具有方差齊性,則對數據進行lg轉化并進一步測試。 采用Tukey多重比較檢驗對符合正態分布和方差齊性的數據進行單因素方差(One-way ANOVA)分析。 對于不符合正態分布及lg轉化后仍不具有方差齊性的數據,采用非參數檢驗并通過Kruskal-Wallis測試進行顯著性差異分析。 P <0.05表示各組數據差異顯著。

  2 結果與分析

  2.1 群體感應淬滅活性菌株的篩選

  經A136液體X-gal法篩選發現,2株細菌(BDZ5和W1B)的菌液對信號分子C6-HSL具有顯著的降解作用(P <0.05),且經沸水處理后,2株QQ活性菌株均喪失了C6-HSL降解活性。

  2.2 活性菌株16S rDNA鑒定結果

  菌株BDZ5和W1B的系統發育樹,BDZ5被鑒定為芽孢桿菌屬(Bacillus),且與枯草芽孢桿菌(B.subtilis)具有最高的相似度(100%),W1B被鑒定為科貝特氏菌屬(Cobetia),且與?曝愄厥暇(C. marina)親緣關系最近(98%)。

  2.3 體外安全性評估結果

  菌株BDZ5和菌株W1B在血平板上無明顯的溶血現象,表明菌株BDZ5和W1B在該實驗條件下不產生溶血素。 藥物敏感性實驗結果顯示,菌株BDZ5對頭孢氨芐(Cephalexin)、頭孢唑林(Cefamezin)、頭孢拉定(Cefradine)等13種抗生素高度敏感; 對苯唑西林(Oxacillin)中度敏感; 菌株W1B對羧芐西林(Carbenicillin)、頭孢他啶(Ceftazidime)、頭孢曲松(Ceftriaxone)等8種抗生素高度敏感; 對氨芐西林(Ampicillin)、哌拉西林(Piperacillin)、頭孢氨芐(Cephalexin)等8種抗生素中度敏感。

  2.4 感染細菌后各組凡納濱對蝦累積死亡率

  注射感染96 h后,L-BDZ5、H-BDZ5、L-W1B和H-W1B組凡納濱對蝦累積死亡率均低于NC組,且H-W1B組最低,但與NC組相比無顯著差異(P>0.05)。 L-PC和H-PC組累積死亡率均高于NC組,且H-PC組最高,與NC組之間相比無顯著差異(P>0.05)。 此外,H-PC組的凡納濱對蝦累積死亡率顯著高于H-W1B組(P <0.05)。

  2.5 感染細菌后各組對蝦血清免疫酶活性

  注射1×104 CFU/ml的BDZ5菌懸液使凡納濱對蝦血清中SOD活性顯著提高(P <0.05)(圖5A),其余各組與NC組相比無顯著差異(P>0.05); 注射不同濃度的BDZ5和W1B菌懸液對凡納濱對蝦血清中的NOS活性無顯著影響(P>0.05) ,但觀察到H-PC組凡納濱對蝦血清中NOS活性顯著高于NC組(P <0.05);各組凡納濱對蝦血清中LZM活性與NC組相比均無顯著差異(P>0.05) ,但H-W1B組的LZM活性顯著高于H-PC組(P <0.05);注射不同濃度的BDZ5和W1B菌懸液對凡納濱對蝦血清中的抗菌酶活性無顯著影響(P>0.05),但注射1×106 CFU/ml的副溶血弧菌菌懸液使凡納濱對蝦血清中抗菌酶活性顯著降低(P <0.05)。

  2.6 培養條件優化結果

  隨著培養時間的延長,菌株BDZ5和W1B的生長及信號分子C6-HSL降解率均逐漸提高,48 h時達到最高,繼續延長培養時間,菌株BDZ5和W1B的生長及信號分子C6-HSL降解率呈下降趨勢。 起始pH為7.0時,最有利于菌株BDZ5生長; 起始pH為7.5時,菌株BDZ5的信號分子C6-HSL降解率達到最高。 起始pH為6時,菌株W1B生長最好; 起始pH為7.5時,菌株W1B對信號分子C6-HSL的降解率最高。

  菌株BDZ5的生長隨鹽度的提高呈先上升后下降的趨勢,鹽度為20條件下,菌株BDZ5生長情況最好; 當鹽度為30時,菌株BDZ5對信號分子C6-HSL的降解率達到最高。 菌株W1B在鹽度≤20的條件下無法培養,且在鹽度為40條件下的生長情況顯著好于鹽度為30 (P <0.05);但在鹽度為30條件下,菌株W1B對信號分子C6-HSL的降解率顯著高于鹽度為40 (P <0.05)。

  培養基中添加一定量的Mn2+和Fe2+使菌株BDZ5的生長顯著提高(P <0.05),其中,Mn2+的效果最好;且Mn2+能顯著提高菌株BDZ5對信號分子C6-HSL的降解能力(P <0.05)。Mn2+、Fe2+、Mg2+和Ca2+均能使菌株W1B的生長顯著提高(P <0.05),且Ca2+效果最好;Mn2+和Ca2+能提高菌株W1B對信號分子C6-HSL的降解率,但與對照組相比未達到顯著水平(P>0.05)。

  3 討論

  本研究采用A136液體X-gal法從健康的凡納 濱對蝦體內及養殖環境中篩選得到2株對信號分子C6-HSL具有降解作用的活性菌株BDZ5和W1B,經鑒定分別為芽孢桿菌屬和科貝特氏菌屬。 近年來,QQ菌的相關研究已經成為了微生物領域的熱點,但其在水產養殖領域的應用尚處于起步階段。

  此前,已有研究表明,芽孢桿菌屬的某些細菌,如短小芽孢桿菌(B. pumilus)、蘇云金芽孢桿菌(B.thuringiensis)、蠟樣芽孢桿菌(B. cereus)、巨大芽孢桿菌(B. megaterium)和枯草芽孢桿菌等能抑制某些病原菌的QS系統,降低病原菌的毒力并對水產動物起到保護作用(Bai et al, 2008; Pan et al, 2008; 宋增福等,2013; Tinh et al, 2014; 韋存等,2018),本研究結果再一次表明了芽孢桿菌屬細菌的QQ功能。

  科貝特氏菌是生活在海水環境中的一種革蘭氏陰性菌,目前,針對科貝特氏菌的研究相對較少,尤其是在QQ方面。 Trentin等(2011)曾從干擾病原菌QS系統的角度探究了?曝愄厥暇鷮Ρ砥て咸亚蚓(Staphylococcus epidermidis)生物膜形成的影響,但并未給出直接研究結果來證明?曝愄厥暇腝Q活性。 該研究是首次報道關于科貝特氏菌屬對信號分子C6-HSL具有強降解作用。

  本研究發現,經沸水浴處理后,2株功能菌株均喪失了對信號分子C6-HSL的降解活性。 QQ菌通過QQ活性物質起到抑制病原菌QS系統的作用,根據分子量的大小,可分為大分子QQ酶和小分子QS阻抑物(于敏等, 2018)。 其中,AHL降解酶是目前大分子QQ物質研究的重點,根據降解機制的不同,AHL降解酶又分為AHL內酯酶、AHL;D移酶和AHL氧化還原酶,多數的AHL降解酶不具有耐熱性,因此,可通過檢測功能菌株降解信號分子的耐熱性,初步判斷菌株是否具有AHL降解酶。 本研究結果表明,功能菌株可能存在AHL降解酶活性,但菌株BDZ5和W1B各具有何種QQ酶仍需進一步深入探討。

  益生菌的安全性問題備受關注,目前,還沒有形成完善的安全性評價體系。 當前,針對益生菌安全性的研究主要集中在體外研究和體內研究2個方面(郝生宏等, 2004)。 溶血實驗和藥物敏感性實驗是體外安全性評估的2個重要方面(Baumgartner et al, 1998; 劉勇等, 2011)。 某些細菌能釋放溶血素引起紅細胞膜裂解而導致嚴重的細菌性疾病(Craig et al, 2017),甚至對人類具有潛在的危害。

  本研究中,枯草芽孢桿菌BDZ5和?曝愄厥暇鶺1B均未表現出明顯的溶血現象,表明在實驗條件下,該2株菌株均不產生溶血素。 藥物敏感性實驗是體外安全性評價的另一個重要方面,其主要目的是測試待測菌株對抗生素是否具有耐藥性,從而防止耐藥益生菌無限生長及對機體內源性菌株產生耐藥性誘導(王曉琳, 2016)。 本研究發現,菌株BDZ5對頭孢氨芐、頭孢唑林等13種抗生素敏感,菌株W1B對羧芐西林、頭孢他啶等8種抗生素敏感,并對多數抗生素中度敏感,表明多數抗生素能對該2株菌株進行有效控制。 根據體外安全性評估結果,可以將該2株菌作為潛在益生菌應用于水產養殖。

  除了體外安全性評估,對養殖動物進行體內安全性測試也是十分重要的。 對水產動物進行體內安全性測試的方式主要包括注射、浸浴和投喂等。 張歡歡等(2016)采用注射和浸浴的方式檢測功能菌對凡納濱對蝦的安全性; 陳文斌等(2017)采用浸浴的方式發現降氮菌株NB9對對蝦的成活率無顯著影響。 本研究發現,與副溶血弧菌不同,向凡納濱對蝦體內注射 1×104 CFU/ml和1×106 CFU/ml的BDZ5及W1B菌懸液均不會引起對蝦死亡率的升高,進一步表明這2株菌對凡納濱對蝦無明顯毒害作用。

  本研究進一步測試了感染細菌后,各組凡納濱對蝦血清中的免疫及抗氧化相關酶活性,包括SOD、NOS、LZM和抗菌活性。 其中,SOD在清除凡納濱對蝦體內自由基方面具有重要作用(Trenzado et al, 2006); NOS在細菌感染后被激活,通過釋放NO對病原起到滅殺作用(Yao et al, 2010); LZM和抗菌酶在破壞和清除體內病原方面十分重要(Chang et al, 2018)。 這些免疫及抗氧化酶活性的變化反映出凡納濱對蝦受刺激的情況。

  本研究中,未觀察到注射BDZ5和W1B菌懸液對凡納濱對蝦的免疫及抗氧化酶活性具有顯著影響,表明這2株菌對凡納濱對蝦未造成明顯的刺激。 相反,注射1×106 CFU/ml的副溶血弧菌后,NOS活性顯著提高,表明凡納濱對蝦受到了病原的刺激; 抗菌酶活性顯著降低,表明凡納濱對蝦的免疫系統受到了病原的破壞。 此外,還觀察到凡納濱對蝦注射1×106 CFU/ml的副溶血弧菌后的LZM活性顯著低于注射1×106 CFU/ml的W1B,與該2組的累積死亡率數據一致‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍。 總之,通過凡納濱對蝦血清中免疫及抗氧化酶活性的變化進一步說明了BDZ5和W1B具有安全性。

  為探究不同的培養條件對這2株活性菌株生長及功能的影響,本研究以LB液體培養基為基礎培養基進行單因素實驗,分別研究了不同培養時間、起始pH、鹽度和金屬離子對活性菌株生長和信號分子C6-HSL降解率的影響,研究結果可為菌株的大規模發酵及實際應用提供參考。 此外,本研究還發現,不同培養條件對活性菌株的生長和功能的影響具有不一致性,即最適生長條件下,菌株并不一定具有最高的信號分子C6-HSL降解活性,二者之間甚至可能完全相反,這與丁碧婷(2012)的研究結果相似。

  養殖論文范例:無公害水產養殖技術及管理

  綜上所述,本研究從凡納濱對蝦養殖體系中篩選得到2株具有QQ功能的活性菌株,經鑒定分別是芽孢桿菌屬和科貝特氏菌屬。 安全性評價結果表明,這2株活性菌對凡納濱對蝦無明顯毒害作用,可以作為潛在益生菌應用于對蝦養殖,最終通過單因素條件優化實驗確定了2株活性菌的最適生長和信號分子C6-HSL降解條件,為基于QQ角度防治對蝦細菌性病害提供了優良菌種,并為菌株的大規模發酵及后續應用提供了參考資料。 后續研究將集中在QQ活性物質的分離、純化及實際應用效果方面,探究活性菌株的主要功能組分及對對蝦的保護作用,為在實際生產中應用QQ菌株防治細菌性病害提供基礎研究資料。

  作者:于 鵬1,2 葉海斌2 單洪偉1① 馬 甡1 王 騰1

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